細胞名稱：人成骨細胞系hFOB1.19

產品規格：T25培養瓶x1；1.5ml凍存管x2

細胞數量：1x10^6；1x10^6

保存溫度：37℃；-198℃

運輸方式：常溫保溫運輸；干冰運輸

安全等級：1

用途限制：僅供科研1類

培養體系：DMEM高糖培養基+10%FBS+1%雙抗

培養溫度：37℃

二氧化碳濃度：5%

簡介：人成骨細胞系hFOB1.19在0.6mg/ml新霉素G418存在下，用溫度敏感的表達載體pUCSVisA58轉染自然流,產的胎兒四肢組織，建立了此細胞系。在許可溫度33.5oC下細胞分裂很快，而在限制溫度39.5oC下細胞極少分裂或不分裂。這些細胞具有分化為表達造骨細胞表型的成熟造骨細胞的能力。這些細胞提供了一個同質化的快速增殖模型系統，用于研究正常人造骨細胞的分化，造骨細胞生理和激素，生長因子，和對造骨細胞的功能及分化有影響的細胞因子。該細胞引種自ATCC CRL-11372

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發現污染，請及時拍照與我們聯系。

細胞用途：僅供科研使用。

細胞接收后的處理：

1）收到細胞后，請檢查發貨培養瓶的狀況，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，最,好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態的依據。

3）觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

4）貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。

5）懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基）。

6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后第,一次傳代建議1：2傳代。

驗收細胞注意事項

1、收到人成骨細胞系hFOB1.19細胞，請查看瓶子是否有破裂，培養基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快聯系。

2、收到人成骨細胞系hFOB1.19細胞，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題，細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況，出現此狀態時，請不要打開細胞培養瓶，應立即將培養瓶置于細胞培養箱里靜止3-5小時左右，讓細胞先穩定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。

3、收到人成骨細胞系hFOB1.19細胞后，請鏡下觀察細胞，用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞，接種到一個新的培養瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養基，使用進口胎牛血清。剛接到細胞，若細胞不多時血清濃度可以加到15％去培養。若細胞迏到80%左右，血清濃度還是在10％。

4、收到人成骨細胞系hFOB1.19細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養瓶中培養基吸出，留下5-10ML培養基繼續培養：超過80%匯合度時，請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞，吸出培養液，1000轉/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。

5、將培養瓶置于37℃培養箱中培養，蓋子微微擰松。吸出的培養基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時之需。

6、24小時后，細胞形態已恢復并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細胞）將培養瓶里的培養基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時間以具體細胞為準，一般1-3分鐘，不超過5分鐘。可以放入37℃培養箱消化。輕輕晃動瓶壁，見細胞脫落下來，加入3-5ml培養基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之完全脫落，然后將溶液吸入離心管內離心，1000rpm/5min。棄上清，視細胞數量決定分瓶數，一般一傳二，如細胞量多可一傳三，有些細胞不易傳得過稀，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶，以具體細胞和經驗為準。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。

7、貼壁細胞，懸浮細胞。嚴格無菌操作。換液時，換新的細胞培養瓶和換新鮮的培養液，37℃，5%CO2培養。

特別提醒：原瓶中培養基不宜繼續使用，請更換新鮮培養基培養。